W centrum obrazu widoczni m.in.: król Zygmunt II August (z krucyfiksem w dłoni), biskup krakowski Filip Padniewski odczytujący tekst Unii (w mitrze biskupiej na głowie), prymas Jakub Uchański (w złotej szacie obok Padniewskiego), kasztelan krakowski Marcin Zborowski, bohater bitwy pod Orszą, a potem pierwszego rokoszu szlachty przeciw królowi, de facto nie żył już w oresie Unii Lubelskiej (z wyciągniętą dłonią położoną na otwartym Ewangeliarzu i z rulonem w drugiej dłoni). Obok niego klęczy Mikołaj Radziwiłł zwany Rudym, brat ukochanej żony króla Barbary (z obnażonym mieczem w dłoni), a zanim modli się kolejny były przeciwnik Unii marszałek wielki koronny Jan Chodkiewicz, (ze splecionymi dłońmi, odziany w bordową szatę). Nad nim stoi Andrzej Frycz Modrzewski, działacz reformacji, pisarz polityczny, autor traktu "O naprawie Rzczypospolitej" (z bujną brodą, w czarnej szacie, obejmujący chłopa). Ponad nimi stoi na podwyższeniu Anna Jagiellonka, siostra króla (w bogatym, jasnym stroju). Na lewo od króla ukazani zostali: Walery Protaszewicz, biskup wileński (siedzi na purpurowym krześle w granatowej szacie, de facto nie było go w tym czasie w Lublinie), nad którym pochyla się Jan Łaski, twórca polskiego kalwinizmu (z bujną brodą w zielonej szacie). Na lewo od nich siedzi kardynał Stanisław Hozjusz, zagorzały wróg reformacji, ale zwolennik Unii (w czerwonej szacie). Obok kardynała, z ręką na oparciu jego fotela, stoi Łukasz Górka, protestant i opiekun luteran (z ciemną brodą, de facto nie było go w tym czasie w Lublinie), a z drugiej strony fotela kardynała stoi marszałek wielki koronny Jan Firlej, zwolennik pełnej unii Korony i Litwy (z jasną brodą, podpierający się na lasce marszałkowskiej). ( Interpretacja wielu postaci i przedmiotów widocznych na obrazie jest oczywiście, jak w przypadku większości arcydzieł historycznych mistrza Matejki, niepewna, dyskusyjna i wielowymiarowa).
Obraz olejny z 1869 roku. Dawniej w zbiorach Wiktora Baworowskiego. Obecnie znajduje się w Muzeum Lubelskim (na zamku).
Źródło kopii cyfrowej obrazu: Wikimedia Commons (fot. Mathiasrex Maciej Szczepańczyk).